分子生物学

质粒标准品构建服务

对于进行绝对实时荧光定量PCR实验的研究人员来说,质粒的质量往往决定着实验的成败,因为需要质粒作为模板来制作标准曲线。

标准曲线的制备是绝对荧光定量PCR实验的关键步骤,方法是先将测定基因的目的片段连接到载体中,然后转化大肠杆菌,获取阳性克隆,提取质粒,测定质粒浓度、计算其拷贝数。最后把质粒稀释成不同浓度的标准品,依据这一系列标准品进行荧光定量PCR,获得Ct值,然后拟合出标准曲线。

测定样品时,标准品与未知样品同时进行PCR循环,根据未知样品的Ct值,结合标准曲线来求得未知样品cDNA的起始拷贝数。

我们为您提供质粒标准品的构建服务,用于制作标准曲线,计算出基因的拷贝数。

实验说明:

  1. 客户应提供获目的基因的序列。
  2. 客户应提供实验所需的原材料,如模板,引物,或者载体等。
  3. 客户若只提供组织或者细胞,我们则需要提取RNA或者DNA,扩增出目的条带后连接载体。
  4. 实验周期:1-2周。

 

RNA提取服务

RNA 提取与纯化技术是现代分子生物学技术的基础,cDNA文库构建、蛋白质体外翻译、RNA序列分析及Northern Blot等都需要一定纯度和完整性的RNA。完整性好和纯度高是评价RNA质量的两个关键标准。

要获得完整的RNA取决于能否最低限度地避免纯化过程中内源及外源性RNase对RNA降解;要获得纯度高的RNA取决于能否有效去除RNA提取中DNA和蛋白质。

骐骥公司技术人员经过多年的实验和研究,探索出了提取高质量RNA的方法,不仅可以提取易于获得RNA的动物细胞和组织的RNA,也可以经过短时间摸索提取复杂组织和样品中的RNA。这种经验和服务,将为您的下一步研究打下良好基础,也能加速您的实验进程。

样品要求:

  1. 新鲜组织或者细胞
  2. 液氮保存的细胞或者组织
  3. 液氮速冻后放入-70度冰箱中保存的组织或者细胞(3个月内)

终产品:

  1. RNA样品。
  2. 实验报告,包括RNA浓度值、OD值和电泳照片。

 

 

DNA提取的技术服务

从细胞,组织中提取DNA,可用于后续的PCR、分子标记、文库构建等实验。

终产品:

  1. DNA样品。
  2. 实验报告,包括OD值和电泳图片。

 

实时定量荧光PCR设计和服务

我们提供实时荧光定量PCR设计和服务,也提供从组织/细胞中的RNA提取、反转录和PCR以及检测一条完整的服务途径。

在实验开展前,我们会和您沟通如何采样、保存和运输,设计出合理的PCR方案,优化实验体系,获得真实客观的数据。

实验结束后,也协助您进行数据分析。我们有多年的研究经验,价格优惠合理,不仅做成熟的检测,也可以和您一起进行探索性的研究。

因为实时荧光定量PCR具有很多优点,因此,被广泛用于基因表达分析,基因分型,转基因检测等研究和应用。

实时荧光定量 PCR(Real time PCR) 是通过对 PCR 扩增反应中每一个循环产物的荧光信号进行实时检测,从而实现对起始模板定量及定性的分析。在实时荧光定量 PCR 反应中,引入了一种荧光化学物质,随着 PCR 反应的进行,PCR 反应产物不断累计,荧光信号强度也等比例增加。每经过一个循环,收集一个荧光强度信号,这样我们就可以通过荧光强度变化监测产物量的变化,从而得到一条荧光扩增曲线。常规PCR 中,扩增产物(扩增子)是通过终点法来分析检测,即PCR 反应结束后,DNA 通过琼脂糖凝胶电泳,然后进行成像分析。而荧光定量PCR 可以在反应进行过程中进行累积扩增产物的分析和检测,即实现了“实时”。

实验结束后,我们提供Ct值,扩增曲线,扩增效率,以及完整的实验报告,包括实验方法和实验中涉及到的各种仪器和试剂。

备注:

  1. 我们免费为您进行内参基因的定量。
  2. 可提供相对定量和绝对定量的标准曲线,也可以为您提供或者构建用于绝对定量的质粒标准品。
  3. 可提供溶解曲线。
  4. 我们主要使用Roche LightCycler 480,LineGene 9600的qPCR仪器进行实验,也可以根据实验选择ABI 7500,7900或者Qiagen Rotor Gene-Q。
  5. 实验设计完成后,我们可在1-2周完成实验。

 

2017年10月16日

  • 分子生物学已关闭评论
  • 179 views
    A+